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氨基酸纸色谱的原理是什么?
发布于:2019-08-31 07:48 点击量:   打印本页 || 关闭窗口
摘要
在纸色谱中,效果的再现性相对较低,分离的吸附更强,并且必须与相对极性的显影剂一起操作。
它是生化分离和鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于定性鉴定和定量测定蛋白质的氨基酸组分。
色谱分离的原理是根据物质在硅胶上的吸附来分离组分。
通常,相对极性的材料易于在硅胶上吸附,并且该层中使用的有机溶剂是流动相。
在色谱法时,将样品置于过滤器的末端。
步骤/如何:
1
极性弱的物质不太可能吸附在硅胶上。
用溶剂洗脱引起一系列吸附→解吸→再吸收→再吸收过程,并且蛋白质通过酶如酸,碱,胃蛋白酶,胰蛋白酶和胰蛋白酶水解成氨基酸作为最终产物。糜蛋白酶
在实验室中,酸水解通常用于水解蛋白质。
2
具有强吸附力的组件具有较小的迁移距离并且从柱中释放,具有弱吸附力的组件具有大的迁移距离并且使该列首先离开。
将蛋白质在110℃的盐酸溶液中加热约20小时以破坏肽键。此时蛋白质完全降解为氨基酸。
混合氨基酸以两个阶段连续分布。
3,
纸色谱法是使用滤纸作为载体的分区色谱法。
它使用不同的材料在同一推进剂中具有不同的分配系数。由于不同的分配系数(Kd),它们分布在滤波器上的不同位置。
分离的目的通过色谱法实现。
在某些条件下,溶剂系统中物质的分配系数是恒定的。
注意:
极性较小的乙酸乙酯:石油醚体系。更极性的甲醇:氯仿体系。高极性甲醇:水:正丁醇:乙酸体系。它由有机溶剂和水组成。
纤维素滤纸对水具有强亲和力(纤维素分子的葡糖基中的?OH基团通过氢键与水相互作用)。